Skip to content

Czas protrombinowy do wykrywania zanieczyszczonych heparyn

3 tygodnie ago

893 words

Niedawny skandal związany z heparyną wynikał ze stosowania zanieczyszczonej heparyny, która spowodowała poważne zdarzenia niepożądane, w tym śmierć1. Zanieczyszczenie zidentyfikowano jako syntetycznie przesycony siarczan chondroityny (OSCS) .2 Pomimo braku ostatecznego dowodu związku przyczynowo-skutkowego, Wykazano, że OSCS ma działanie farmakologiczne, które może przyczyniać się do obserwowanych reakcji typu alergicznego.3 Ponadto, podejrzewa się, że OSCS jest odpowiedzialne za obserwowaną zwiększoną częstość występowania małopłytkowości wywołanej przez heparynę. 2.4 Zrewidowane monografie dotyczące heparyny w amerykańskich i europejskich farmakopeach obejmują obecnie dwa obowiązkowe testy identyfikujące OSCS – spektroskopia magnetycznego rezonansu jądrowego i elektroforeza kapilarna. Jednak metody te są technicznie trudne, nie są powszechnie znane i nie mogą być łatwo zastosowane w praktyce klinicznej.
Ryc. 1. Ryc. 1. Redukcja czasu krzepnięcia w oznaczeniu czasu protrombiny przez heparynę zawierającą nadsulfonowany siarczan chondroityny. Połączone próbki ludzkiego osocza traktowano niefrakcjonowaną heparyną (Heparin Na, część nr 73508019, Novartis), niefrakcjonowaną heparyną zanieczyszczoną nadsiarczonym siarczanem chondroityny (OSCS) (16,4%) (Rotexmedica) lub syntetyzowanym OSCS przez zmieszanie 10 .l roztworu zawierającego stężenie 10 razy wyższe niż stężenie w osoczu w 0,9% roztworze chlorku sodu z 90 .l osocza. Kontrolą było osocze uzupełnione chlorkiem sodu. Panel A pokazuje zależne od stężenia działanie próbek na czas protrombinowy. Zastosowanym odczynnikiem był Thromborel S (Dade-Behring), a instrumentem był Koagulometr KC10 (Amelung). Podobne wyniki uzyskano za pomocą turbidymetrii (Behring Coagulation System, Dade-Behring). Standardowe odchylenia czasów krzepnięcia wynosiły ogólnie 2,5% lub mniej. Maksymalne skrócenie czasu protrombinowego obserwowano przy stężeniu w osoczu .g na mililitr. I słupki oznaczają odchylenia standardowe. Panel B pokazuje procentowe zmniejszenie czasu protrombinowego przez niefrakcjonowaną heparynę, niefrakcjonowaną heparynę zawierającą 4,4 do 52,2% OSCS, OSCS, enoksaparynę i enoksaparynę zawierającą 7,0% OSCS, każde w stężeniu w osoczu wynoszącym ug na mililitr. Procentowe zmniejszenie obliczono dla wzoru 100 – ([średni czas koagulacji próbki ÷ średni czas krzepnięcia kontrolnego] × 100).
Podajemy informację o zastosowaniu czasu protrombinowego w celu wykrycia zanieczyszczenia OSCS zarówno w niefrakcjonowanej heparynie, jak i heparynach o niskiej masie cząsteczkowej. Zgodnie z oczekiwaniami, jedynie stężenia w osoczu wynoszące 5 .g na mililitr (około jm na mililitr) lub więcej niefrakcjonowanej heparyny i 10 .g na mililitr niefrakcjonowanej heparyny zanieczyszczonej 17,3% OSCS (zanieczyszczona niefrakcjonowana heparyna) nieznacznie wydłużały czas protrombinowy (o 9%). i 12%, odpowiednio) (rysunek 1A). Przy stężeniach 5 .g na mililitr lub mniej, zanieczyszczona, niefrakcjonowana heparyna, ale bez niefrakcjonowanej heparyny, skróciła czas protrombinowy. Jednak niezbędne jest użycie odczynnika czasu protrombinowego, który nie zawiera związku neutralizującego heparynę, takiego jak polibren, ponieważ ten związek także antagonizuje działanie OSCS.
Aby zweryfikować te obserwacje, zsyntetyzowaliśmy OSCS przez siarczanowanie 4-siarczanu chondroityny.5 Podczas gdy 4-siarczan chondroityny nie modyfikował czasu koagulacji, OSCS wykazywał słabą aktywność przeciwzakrzepową w stężeniach większych niż 10 .g na mililitr, ale skracał czas protrombinowy bardziej niż zanieczyszczona niefrakcjonowana heparyna Niefrakcjonowana heparyna uzupełniona o 17,4% OSCS dawała efekty identyczne jak w przypadku zanieczyszczonej niefrakcjonowanej heparyny. Zmniejszenie czasu krzepnięcia przez niefrakcjonowaną heparynę zawierającą OSCS wzrosło wraz ze wzrostem zawartości OSCS (Figura 1B). Zniknęły również zanieczyszczone heparyny drobnocząsteczkowe, takie jak enoksaparyna (Figura 1B).
Wysoce siarczanowane polisacharydy, takie jak OSCS, działają jako antykoagulanty, ale indukują również aktywację kontaktowe, sprzyjając koagulacji in vitro.3 Jednakże, z analizami czasu aktywowanej częściowej tromboplastyny (również stosowanymi do oznaczania heparyny w USA i europejskich farmakopeach) w w którym koagulacja jest inicjowana przez aktywatory kontaktowe, takich efektów nie można rozpoznać. Natomiast czas protrombinowy jest odpowiedni do określenia takich efektów prokoagulacyjnych z dwóch powodów. Po pierwsze, koagulacja jest indukowana przez tromboplastynę. Po drugie, czas protrombinowy jest dość niewrażliwy na heparyny, tak że żaden efekt prokoagulacyjny OSCS nie jest przesłonięty.
Podsumowując, czas protrombinowy można zastosować w zwalidowanej formie jako czułe badanie przesiewowe do kontroli jakości heparyn. W praktyce klinicznej może to być proste i szybkie badanie w celu sprawdzenia zastosowanej heparyny, gdy rozwija się trombocytopenia typu 2 wywołana heparyną lub reakcje typu alergicznego u pacjenta przyjmującego heparynę.4
Susanne Alban, Ph.D.
Susanne Lühn, Pharm.D.
Christian-Albrechts University Kiel, D-24118 Kilonia, Niemcy
uni-kiel.de
Dr Alban zgłasza otrzymywanie opłat za konsultacje od GlaxoSmithKline i opłat za wykłady od CSL Behring, GlaxoSmithKline, LEO Pharma, Novartis i Pfizer. Nie zgłoszono żadnego innego potencjalnego konfliktu interesów związanego z tym pismem.
Ten list (10.1056 / NEJMc0807070) został opublikowany na stronie www.nejm.org w dniu 3 grudnia 2008 r.
5 Referencje1. Drugie warsztaty nt. Charakterystyki produktów heparynowych. Strasburg, Francja: Europejska Dyrekcja ds. Jakości Leków i Opieki Zdrowotnej (EDQM), 2008. (Dostęp do 24 listopada 2008 r., Http://www.edqm.eu/site/Download-527.html.)

2. Guerrini M, Beccati D, Shriver Z, i in. Nadsiarczany siarczan chondroityny jest zanieczyszczeniem heparyny związanym z niekorzystnymi zdarzeniami klinicznymi. Nat Biotechnol 2008; 26: 669-675
Crossref Web of Science Medline
3. Kishimoto TK, Viswanathan K, Ganguly T, i in. Zanieczyszczona heparyna związana z niepożądanymi zdarzeniami klinicznymi i aktywacją układu kontaktowego. N Engl J Med 2008; 358: 2457-2467
Bezpłatny, pełny tekst Web of Science Medline
4. Greinacher A, Warkentin TE. Zanieczyszczona heparyna. N Engl J Med 2008; 359: 1291-1292
Bezpłatny, pełny tekst Web of Science Medline
5. Maruyama T, Toida T, Imanari T, Yu G, Linhardt RJ. Zmiany konformacyjne i działanie przeciwzakrzepowe siarczanu chondroityny po jego O-sulfonowaniu. Carbohydr Res 1998; 306: 35-43
Crossref Web of Science Medline
(10)
[hasła pokrewne: anatomia palpacyjna, forum kulturystyczne, pokrowce antyroztoczowe ]

Powiązane tematy z artykułem: anatomia palpacyjna forum kulturystyczne pokrowce antyroztoczowe